Новости

Ⅰ. Принцип технологии ПЦР

В этом году этот день бушует по всему миру, и все, должно быть, слышали о тестировании нуклеиновых кислот. В обнаружении эпидемии нуклеиновых кислот центральную роль играет технология флуоресценции ПЦР, которая может помочь инспекторам быстро и точно определить, инфицированы ли они вирусом.

Так что же такое технология ПЦР?

ПЦР является аббревиатурой от полимеразной цепной реакции. Короче говоря, ПЦР состоит из трех основных стадий реакции: высокотемпературная денатурация-низкотемпературный отжиг-расширение средней температуры:

1. Денатурация ДНК, чтобы стать одноцепочечной

После того, как матричная ДНК нагревается примерно до 95 ° С в течение определенного периода времени, двухцепочка матрицы ДНК диссоциируется на одноцепочку, так что она может связываться с праймером и готовиться к следующему раунду реакции.

2. Отжиг низкой температуры

После того, как матричная ДНК денатурируется на отдельные нити, температуру понижают примерно до 55 ° С, и праймеры спариваются с комплементарными последовательностями матричных одиночных нитей ДНК.

3. Расширение средней температуры

Под действием фермента Taq шаблон ДНК и конъюгаты праймера используют dNTP в качестве сырья реакции и последовательность-мишень в качестве шаблона, в соответствии с принципом спаривания оснований и полузарезервированной репликации и, наконец, синтезируют новую полузарезервированную цепь репликации, комплементарную к цепи ДНК шаблона.

Ⅱ. Методы обнаружения флуоресцентной ПЦР

В настоящее время большинство реагентов обнаружения COVID-19, одобренных Государственным управлением по контролю за лекарствами Китая, используют флуоресцентные методы ПЦР для обнаружения COVID-19.

Флуоресцентный метод ПЦР относится к добавлению флуоресцентных групп в реакционную систему ПЦР. С ходом амплификации ПЦР продукты реакции продолжают накапливаться, и интенсивность сигнала флуоресценции также увеличивается пропорционально. График кривой флуоресцентного усиления, обнаружение процесса флуоресценции ПЦР в реальном времени.

Ⅲ. Принципы выбора ПЦР флуоресцентных расходных материалов

1. Материал

ПЦР обычно производится из материала PP, потому что расходные материалы PCR/qPCR обычно находятся в прямом контакте с реагентами или образцами, в то время как полипропиленовый (PP) материал является биологически инертным материалом, поверхность не легко прилипает к биомолекулам и имеет хорошую химическую стойкость и температуру. Допуск (можно автоклавировать при 121 ° C, а также выдерживать изменения температуры во время термического цикла). Все расходные материалы ПЦР изготовлены из полипропилена.

2. Объем трубки/пластины ПЦР

Как выбрать пробирки/пластины для ПЦР разного объема?

Цель выбора: выберите соотвествовавшийся продукт согласно специфическим экспириментально требованиям. Объем пробирок для ПЦР может в основном соответствовать требованиям реакций ПЦР. ПЦР-пробирки идеально подходят для экспериментов с ПЦР/qPCR с низкой и средней пропускной способностью, причем одиночные пробирки и полоски являются двумя наиболее часто используемыми форматами.

Одна трубка обеспечивает гибкость для установки точного количества реакций для запуска. Альтернативно, одна пробирка 0,5 мл может быть выбрана для больших объемов реакции.

Муфты обычно доступны в формате 8 или 12 трубок с отдельными или с крышками. Совместимость с одно-и многоканальными пипетками для экспериментов с низкой и средней пропускной способностью. Полоски с крышками открывают и закрываются пробирки независимо, чтобы предотвратить загрязнение образца.

3. Толщина стенки

Толщина стены трубки сразу влияет на термальную проводимость, и весьма тонкие толщины стены оптимизируют передачу тепла и уменьшают время цикла. Ультратонкий пластик примерно на 50% тоньше стандартной версии, что еще больше снижает тепловой барьер, что приводит к более быстрому и надежному отклику. Все расходные материалы для ПЦР-это ультратонкие стенки трубок.

4. Цвет

Пластинки ПЦР часто доступны в различных цветовых форматах для облегчения визуальной дифференциации и идентификации образцов, особенно в экспериментах с высокой пропускной способностью. Для обычных реакций ПЦР можно использовать прозрачные или цветные пробирки для ПЦР, а прозрачные пробирки для ПЦР более полезны для управления классификацией образцов.

Хотя цвет пластика не влияет на амплификацию ДНК, для ПЦР рекомендуются высококачественные белые расходные материалы для ПЦР. Поскольку qPCR требует количественного определения интенсивности флуоресцентного сигнала в реальном времени, требуется чувствительная и точная передача флуоресцентного сигнала. Эксперименты показали, что по сравнению с традиционными прозрачными продуктами ПЦР белые продукты ПЦР могут в наибольшей степени отражать флуоресцентный сигнал, уменьшать перекрестное загрязнение космических сигналов и получать результаты количественной ПЦР флуоресценции в реальном времени.

Различные марки инструментов, из-за разного положения флуоресцентного детектора, пожалуйста, обратитесь к материалам, рекомендованным производителем. Для прибора ПЦР реального времени Bio-Rad CFX или Roche 480 производитель рекомендует использовать белые пластины для ПЦР. Поскольку пластина ПЦР либо белая, либо прозрачная и имеет различные характеристики, она подходит для распространенных на рынке инструментов ПЦР.